检测试剂

布病试剂

    布鲁菌病(brucellosis,布病),也称波状热,是布鲁菌引起的急性或慢性传染病,属自然疫源性疾病,临床上主要表现为病情轻重不一的发热、多汗、关节痛等。
    布氏菌属的细菌是一组微小的球杆状的革兰氏阴性菌。宽0.3~0.6μ,长0.6~1.5μ。无芽胞、无鞭毛、不形成荚膜。
    病原学
    姬姆萨染色呈紫红色,柯兹罗夫染色呈红色,其他菌为绿色。布氏菌生长繁殖对营养要求较高,生长缓慢,分裂一次时间约132~227分钟。尤其初代分离的野生株生长更慢,通常需5~7天,有的甚至需20~30天才可生长出可见的菌落。生长最适温度为37℃,个别种型初代生长需一定浓度CO2。
    国际上将布鲁菌分马尔他(羊)、流产(牛)、猪、犬、沙林鼠及绵羊附睾等6个生物种,19个生物型,即羊种(3个生物型)、牛种(8个生物型,牛3型和牛6型菌的生物特性是一致的,1982年国际微生物学会布鲁菌分类学会将其合并为一个生物型称为3/6型)、猪种(5个生物型,原为4型,1982年国际会议上增加第5型)、沙林鼠种、绵羊附睾和犬种各一生物型。中国以羊种菌占绝对优势,其次为牛种菌,猪种菌仅存在于少数地区。近年发现在23个省区,犬中的犬种感染率为7.5%,五省区抽样调查,人群的感染率为6.1%。
    近年因分子生物学的发展,有人根据布氏菌属内DNA同源性,提出布氏菌属内只有一个种,其余者为型的分类方案,但未获公认。 近些年,对布氏菌的分子生物学的研究发展较快。值得提出的是,对布氏菌的毒力相关基因的研究。经研究表明,ery、H2O2酶基因、SOD、RecA、groE、HtrA等基因都与布氏菌的毒力有密切关系。这些工作为布病的病原学研究展示了良好的前景。
    布鲁菌对光、热、常用化学消毒剂等均很敏感;日光照射10~20分钟、湿热60℃10~20分钟、3%漂白粉澄清液等数分钟即可将其杀灭。布氏杆菌在外界环境的生活力较强,在干燥土壤、皮毛和乳类制品中可生存数周至数月,在水中可生存5日至4个月。
    布鲁菌仅产生内霉素,对实验动物具一定毒性。
    发病机理
    布鲁菌自皮肤或粘膜进入人体后,中性多核粒细胞首先出现,被吞噬的牛型细菌可部分被杀死,但羊型菌不易被杀。存活的 布鲁菌随淋巴液到达到局部淋巴结。根据人体的抗病能力和侵入菌的数量及毒力,病菌或在局部被消灭,或在淋巴结中生长繁殖而形成感染灶。当病菌增殖达到相当数量后,即冲破淋巴结屏障而侵入血循环,此时可出现菌血症、毒血症等一系列症状。
    病菌进入血循环后易在肝、脾、骨髓、淋巴结等网状内皮系统中形成新的感染灶,后后中网病菌又可多次进入血循环而导致复发。发热呈波状型(故本病又称波状热)。
    布鲁菌主要寄生于巨噬细胞内,与其他寄生细胞内细菌所引起的慢性传染病一样,其发病机理以迟发型变态反应为主。
    布病的发生发展乃甚为复发,一则与菌血症、内毒素血症、变态反应有关,二则该菌侵犯多个器官,三则抗菌药物与抗体不易进入细胞,所以本病临床表现复杂、难治。
    网状内皮系统在急性期呈弥漫增生,在慢性期则可出现由上皮样细胞、巨细胞、浆细胞、淋巴细胞等所组成的肉芽肿,此系组织对细菌产生的变态反应。肝、脾、淋巴结及骨髓中均可有类似病变。在羊型和猪型布氏杆菌病中,特别是在后者中常有化脓性肉芽肿形成。
    病理改变
    血管的增生破坏性病变也为变态反应所致,主要累及肝、脾、脑、肾等的小血管及毛细血管,导致血管内膜炎、血栓性脉管炎、脏器的浆液性炎症与微小坏死等。
    骨、关节和神经系统的变态反应性炎症主要表现为关节炎、关节强直、脊椎炎、骨髓炎、神经炎、神经根炎等。肺可有出血卡他性肺炎,心脏病变较血管病变少见,有心内膜炎、心肌炎等。肾混浊肿胀,偶见弥漫性肾炎和肾盂肾炎。此外,尚有睾丸炎、附睾炎、子宫内膜炎等。
    主犯脏器
    ⑴运动系统:关节肌肉疼痛。出现膝关节、腰、肩、髋、肘等关节痛。
    ⑵ 神经系统:可引起神经干涸神经根的损伤,导致神经痛。出现腰痛、臀部疼痛、腿痛等。
    ⑶ 呼吸系统:部分患者发生间质性肺炎而出现咳嗽。
    ⑷ 消化系统:急性期病人个别因肝脏损害较重,而出现尿黄、巩膜黄染、肝区不适、食欲减退等消化道症状。
    ⑸ 泌尿生殖系统:男性患者因睾丸炎或附睾炎而出现睾丸疼痛及小腹痛。慢性期可出现精索神经痛,以致出现阳痿、遗精、性机能减退等。女性患者可出现乳房肿痛、腰痛、小腹痛、月经不调、闭经或流血过多,白带过多、性欲减退、早产、流产、死胎等表现。还可发生肾炎、肾孟肾炎、膀胱炎。
    症状危害
    患布病后,首先出现的症状是发烧,体温可达38-40度,不同人发烧的热型差别较大。有的人体温并不太高,波动于37-38度之间,持续时间长,处于长期低热状态;有的人体温呈波浪状,即高热几天,体温降下来几天,又开始高,反复多次,所以布病又称波状热。还有的体温忽高忽低,早晚变化大,病情凶险,呈弛张性发热等等。当前主要是长期低热者多。
    另一个特点是患者多汗,尤其发病初期更为明显,晚上汗更多,汗质粘稠,多出现在头胸部等。
    患者还经常出现骨关节疼痛、肿胀等。男患者易出现睾丸肿大(单例),女患者可有月经不调,流产,白带过多等。发病初期不明显,体温逐渐下降时骨关节症状相继出现。疼痛或骨关节活动障碍的部位多见于大关节。如,腰、骶、髋、肩、肘、膝等关节。常易误诊为风湿病。
    给布病患者查体时还可看到某些部位淋巴结肿大(颈部、腋下、腹股沟等),肝、脾肿大等。
    其他症状如乏力、食欲不振、精神倦怠等类似于感冒。
    总之,布病无明显特征性表现,症状是多种多样的。
    诊断标准
    (一) 流行病学:发病前病人与家畜或畜产品,布氏菌培养物有密切接触史,或生活在疫区的居民,或与菌苗生产、使用和研究密切联系者。
    (二) 临床表现:出现数日乃至数周发热,多汗,肌肉和关节酸痛,乏力兼或肝、脾、淋巴结和睾丸肿大等可疑症状及体征。
    (三) 实验室检查:布病玻片或虎红平板凝集反应阳性或可疑,或皮肤过敏试验后24、48小时分别观察一次,皮肤红肿浸润范围有一次在2.0cm×2.0cm及以上(或4.0cm?以上)(四) 分离细菌:从病人血液、骨髓、其他体液及排泄物中分离到布氏菌。
    (五) 血清学检查:标准试管凝集试验(SAT)滴度为1:100及以上,对半年内有布氏菌苗接触史者,SAT滴度虽达1:100及以上,过2~4周后应再检查,滴度升高4倍及以上,或用补体结合试验(CFT)检查,CFT滴度1:10及以上;抗人免疫球蛋白试验(Coomb'S)滴度1:400及以上。
    诊断疑似病例:具备(一)、(二)、(三)者。
    诊断确诊病例:疑似病例加(四)或(五)中任何一项者。
    流行病学
    分布
    本病全球分布,每年上报WHO的病例数愈50万。地中海地区、亚洲及中南美洲为高发地区。国内多见于内蒙、东北、西北等特区,全国104个疫区均达到基本控制标准,但90年代以来,散发病例以30%~50%的速度增加,个别地区还发生暴发流行。
    传染源
    羊在国内为主要传染源,其次为牛和猪。这些家畜得本病后,早期往往导致流产或死胎,其阴道分泌物特别具传染性,其皮毛、各脏器、胎盘、羊水、胎畜、乳汁、尿液也常染菌。病畜乳汁中带菌较多,排菌可达数月至数年之久。
    传染途径
    在国内牧民接羔为主要传染途径,兽医为病畜接生也极易感染。此外,剥牛羊皮、剪打羊毛、挤乳、切病毒肉、屠宰病畜、儿童玩羊等均可受染,病菌从接触处的破损皮肤进入人体。实验室工作人员常可由皮肤、粘膜感染细菌。进食染菌的生乳、乳制品和未煮沸病畜肉类时,病菌可自消化道进入体内。此外,病菌也可通过呼吸道粘膜、眼结膜和性器官粘膜而发生感染。
    易感人群
    人群对布鲁菌普遍易感,青壮年男性由于职业关系,其发病率高于女性。国内以牧区牧民的感染率最高,多发生于春未夏初或夏秋之间,乃与羊的产羔季节有关。患病后有一定的免疫力,但再感染者并不太少见。
    灾害的影响
    人畜布病一般不受水灾影响,因我国布病疫区皆不在主要河流的两岸,处于干旱的边疆地区;即使在河流两岸洪水对疫情影响不大。但布病受风雪及旱灾影响较大。因旱灾影响牧草质量,风雪灾影响牧区牲畜食草,这就使牲畜抗力下降,布氏菌感染增加,流产畜增多,从而影响人间布病发生。
    预防措施
    1.健康教育:关于防治布病的宣传教育应注意以下几点:(1)人感染布病是来自于染疫的家畜,尤其是羊、牛、猪等。主要传播因子是流产物、乳、肉、内脏、皮毛等。(2)布病是可以预防的,而且是可以自愈和治愈的,增强信心。(3)宣传对象主要是与牲畜接触密切的一些职业人群及疫区和牧区的居民,如兽医、放牧员、饲养员、屠宰工、挤奶工及乳肉加工人员等。(4)宣传教育应与畜牧业发展及脱贫致富结合起来
    2.免疫接种:在世界上只有少数国家主张给人预防接种,我国是其中之一。人用菌苗系104M(B.abortus)冻干弱毒活菌苗,以皮上划痕进行接种,剂量为40~50亿/人次。低温避光条件下运输,在4℃下保存。免疫对象仅限于疫区内职业人群及受威胁的高危人群,接种面不宜过广,而且不宜年年复种,必要时可在第二年复种一次。对孕妇、泌乳期妇女、年老体衰者及有心、肝、肾等疾病患者不宜接种。104M苗也可采用滴鼻方式免疫。
    3.检疫淘汰疫畜、隔离疫畜培养健康畜,以及畜群免疫接种等是预防布病的重要措施。
    环境管理
    出现布病患者应按传染病管理法规定的乙类传染病的报告时间及程序进行报告,一般不应超过24小时。因布病人不传人,故对病人及接触者均不需隔离等处理。对患者所居住环境等也无需特殊处理,但应对周围人群进行布病检疫,发现可疑者应及时处理;对引发布病的传染源必须追查,对患者家中及邻居饲养家畜进行流行病学调查,调查牲畜流产状况、患者接触牲畜历史,接触程度,食用乳肉或内脏情况等。对查出的可疑畜及乳肉制品等应及时有效处理。
    流行期措施
    当出现布病暴发流行时应尽快采取紧急措施。主要包括以下几点:
    1.组建临时领导机构,包括当地人兽医的医疗行政管理人员及有关专业人员。尽快与上级有关行政和业务部门取得联系,并报告。迅速利用现有的通讯宣传设施等进行宣传教育。
    2.对现患及时诊断和治疗,并对周围人群进行检疫。
    3.对传染源进行调查和管理。一般采用专访及座谈,并对牲畜进行检疫。确定外传性(即疫畜来自外地)及内源性(本地疫畜)。查出的传染源及时处理(隔离和淘汰),对各类传播因子,如流产胎儿(牛、羊、猪等),污染乳肉等应做消毒处理或深埋、焚烧等。对传染源曾栖息之处应予以消毒处理。
    4.预防接种,对疫区内高危人群(包括职业人群及非职业人群)予以104M苗免疫;对健康畜或畜群进行预防接种:牛应以S19免疫,羊应以S2苗免疫,因对猪无合适疫苗应注意观察。
 
【布病试剂】牛布鲁氏菌抗体检测试剂盒说明书
【布病试剂】产品名称
通用名称:牛布鲁氏菌抗体检测试剂盒
【布病试剂】包装规格   96份/盒、192份/盒
【布病试剂】预期用途
本试剂盒采用间接ELISA方法定性检测牛血清或血浆样本中的特异性布鲁氏菌抗体,可作为布鲁氏菌病的辅助检测。
【布病试剂】检测原理
如果待检样品中含有布鲁氏菌抗体,就会与包被板上的布鲁氏菌抗原及第二步加入的抗牛二抗酶标结合物特异性结合。间接结合在包被板上的抗牛二抗酶标结合物与底物反应的显色状况即可反映出样品中是否含有布鲁氏菌抗体。
【布病试剂】主要组成成份
序号
名称
规格(96/192T)
序号
名称
规格(96/192T)
1
包被板
96/192孔
7
终止液(6号液)
15mL
2
酶标结合物(1号液)
12/22mL
8
阳性对照品
1mL
3
洗涤液10×(2号液)
100mL
9
阴性对照品
1mL
4
底物液(3号液)
15mL
10
封板膜
3/6片
5
显色液(4号液)
15mL
11
说明书
1份
6
样品稀释液(5号液)
100mL
12
血清稀释板
1/2块
【布病试剂】储存条件及有效期  2~8℃保存,防止冷冻,有效期为12个月。
【布病试剂】适用仪器  含450nm和630nm波长酶标仪;37℃恒温设备;可调微量移液器。
【布病试剂】样品要求
1、本试剂仅适用于检测牛血清或血浆。
2、为取得最佳实验效果,避免使用含叠氮钠、高血脂、长菌以及严重溶血的样品;
3、短期(3天内)将进行检测的血清样品可存放于2~8℃;如需长期保存,应置于-20℃以下,避免反复冻融。
【布病试剂】检验方法
1、洗涤液配制:用蒸馏水或去离子水将洗涤液10×(2号液)按1:10稀释(例如,取100mL洗涤液10×,加900mL蒸馏水或去离子水混合),充分混匀即为工作浓度洗涤液。
2、样品稀释及加样:用样品稀释液(5号液)将待检血清按1:400稀释,在样品孔每孔仅加入已稀释的待检样品100μL;如果采用血清稀释板稀释样品,其使用方法详见说明书背面。
3、加对照品:阴性、阳性对照品不用稀释,直接加样。空白对照2孔,每孔仅加入100μL样品稀释液;阴性对照2孔,每孔仅加入100μL阴性对照品;阳性对照2孔,每孔仅加入100μL阳性对照品。盖好封板膜,37℃避光反应30分钟。洗板:甩去孔内液体,每孔注满(若用洗板机每孔加250μL)工作浓度洗涤液洗涤3次,每次均需停留1分钟;最后一次甩净,拍干。
4、加酶反应:除空白对照孔外,其余每孔加酶标结合物(1号液)100μL,盖好封板膜,37℃避光反应30分钟。甩去孔内液体,如上洗板,拍干。
5、显色反应:按所需用量,临用前取等体积底物液(3号液)和显色液(4号液)充分混匀,每孔加100μL,盖好封板膜,37℃避光反应10分钟。
6、终止反应: 加终止液(6号液)50μL,以空白对照调零,用酶标仪于450nm波长(630nm作为参比波长)读取OD值。
【布病试剂】参考值
有效性判定:
阴性对照孔OD值≤0.20(若大于0.20则实验无效);
阳性对照孔OD值≥0.30(若小于0.30则实验无效)。
【布病试剂】检验结果的解释
S/P=
样品S/P ≥0.2,判为布鲁氏菌抗体阳性;
样品S/P <0.2,判为布鲁氏菌抗体阴性。
【布病试剂】检验方法的局限性   本试剂盒仅供筛查,不作为确诊依据。
【布病试剂】注意事项
1、试剂盒各组份从冷藏环境中取出时,必须室温平衡15-30分钟,方可开封启用。未使用2、完的试剂组份应及时放回2~8℃密封保存。
3、浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释前可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响效果。
4、加试剂前应将试剂轻摇、混匀。
5、孵育时必须用封板膜密封板孔,封板膜不可以重复使用。
6、不同批次试剂盒的试剂组份或说明书不可混用。瓶盖每次使用后要盖紧,各瓶之间瓶盖不可混用。
7、用弃的试剂盒及样品都应按污染物妥善处理。试剂盒内终止液有腐蚀性,须小心使用。
 
 
提示:本文件内容及相关参数如有变更,恕不另行通知。我公司保留在不另行通知的情况下,对其中所包含内容进行更改的权利。具体操作须以产品内说明书为准。
 

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