检测试剂

包虫试剂

    棘球蝴病(echinococcosis)是由棘球绦虫的幼虫寄生于人兽体内引起的疾病,俗称包虫病(Hydatidosis )。
    包虫病是棘球绦虫的幼虫寄生在人体所致的一种人兽共患寄生虫病。我国有囊型包虫病和泡型包虫病二种,分别由细粒棘球绦虫的幼虫(棘球蚴)和多房棘球绦虫的幼虫(泡球蚴)寄生人体组织器官所致。囊型包虫病呈世界性分布,畜牧业发达的国家和地区多见。我国包虫病高发流行区主要集中在高山草甸地区及气候寒冷、干旱少雨的牧区及半农半牧区,以新疆、青海、甘肃、宁夏、西藏、内蒙古、陕西、河北、山西和四川北部等地较为严重。包虫主要来源于动物的排泄物,没有什么有效的治疗方式,在西藏被视为西藏第一癌症。
    特征
    虫体呈淡红色,长10~50厘米。成熟体节长7毫米,宽2~3毫米,呈长卵圆形,外观如黄瓜籽。每个成熟节片含两套雌雄生殖器官,生殖孔开口于体节两侧的中央部。蚤类及犬毛虱为犬绦虫的中间宿主,在其体内发育为似囊尾蚴。终宿主吞食了含似囊 尾勘的蚤或虱而被感染,在小肠内约经3周发育为成虫。 寄生于犬小肠内的绦虫种类很多,不仅成虫期对犬、猫的健康危害很大,而其幼虫期大多以其他家畜(或人)作为中间宿主,严重危害家畜和人体健康。
    生活史
    棘球绦虫生活史必须依赖两种哺乳动物宿主才能完成其生活周期。经过虫卵,棘球蝴和成虫三个阶段。
    成虫寄生于犬科动物(如宠物狗、狼、野狗、豺狗等)和猫科动物的小肠内,孕节片或虫卵随粪便排出;细粒棘球绦虫的虫卵经由有蹄动物中间宿主(如绵羊、牛、猪、马、骆驼)吞入虫卵发育成棘球蝴,多房棘球绦虫经由啮齿目和兔形目动物吞入虫卵发育成棘球蝴(也称泡球蝴);棘球蝴在肝、肺和其他脏器中发育,人因接触宿主感染后导致棘球蝴在肝、肺等器官形成占位性病灶;棘球蝴被终宿主犬吞食后在犬的小肠内发育为成虫,而细粒棘球绦虫主要在畜牧业较发达地区的家畜中循环,细粒棘球绦虫的中间宿主有多种,主要为有蹄类家畜(例如,绵羊、山羊、猪、骆驼、马,牛);多房棘球绦虫主要在啮齿目和兔形目等野生动物中循环,其主要的中间宿主是鼠兔、青海田鼠等。
    传染
    (1)主要传染源:传染源感染的犬、狼和猫是多房棘球蝴病狼和狐是囊型包虫病(包虫病)的传染源。
    (2)感染途径与方式:包虫病是通过食入虫卵而传播,中间宿主包括人、有蹄类动物、鼠类等。感染的途径主要为经口食入。人的感染主要为饮水和饮食方式。
    (3)易感人群:不同种族和性别的人对棘球蝴均易感。从事牧业生产、狩猎和皮毛加工的人群为高危人群。
    流行特点
    流行因素
    (1)自然疫源性:我国棘球蝴病(包虫病)流行的特点是由西向东有明显减弱趋势,那里大部分地区属高寒草甸,干旱少雨;有些地区是高寒山区,气候寒冷。这些地区以农牧业作为主要生产生活类型,各种动物资源十分丰富,且相互之间构成较为固定的捕食与被捕食食物链,构成了棘球蝴病(包虫病)在动物间、人和动物间传播和流行的有利条件。
    (2)犬科和猫科动物:是棘球绦虫的终末宿主。棘球绦虫寄生于它们的小肠,虫卵随犬粪便排出,污染水源、土壤、草场、畜舍和食物,人、畜及小型哺乳动物食入虫卵而被感染。特别是在青藏高原地区,家犬己成为农牧民重要的生产资料,数量庞大;此外,藏族牧民全民信教,反对杀生,使流行区存在大量野犬或无主犬,这些犬是棘球蝴病(包虫病)最为重要的传染源。特别是多房棘球绦虫,最初是在野生食肉目动物和小型哺乳类动物中循环的寄生虫,但由于家犬的介入,增加了其生活传播环节,即野生循环和家养循环,后者是造成泡球蝴病发病率增加的主要原因,同时也增加了防治难度(3)虫卵:棘球绦虫的虫卵在外界有非常强的适应能力,它能在自然状态下可保持感染力。因此,犬科动物排出的虫卵随犬、人类活动及土、风、水的散播,留存于人及家畜、小型哺乳动物活动场所的机会多,相应的人和动物感染机会就增多。
    (4)生态环境改变:我国西北部牧区长期存在草场载畜过多,草原因过度放牧而导致退化甚至沙漠化,这种生态变化促进了小型哺乳动物的生长繁殖,造成泡球蝴病发病率的增加。
    (5)人类生产活动:狩猎、从事野生动物皮毛贩运、加工、销售或使用是造成人类感染的高危因素。在青藏高原广大牧区,牧民仍从事传统的牧业生产方式,四季游牧,牲畜可以放养到自然死亡,大大增加了牲畜感染虫卵和包囊得到充分发育的机会;同时,牧区以个体散在家庭屠宰为主,感染包囊的牲畜内脏随意丢弃或喂狗,犬和其他野生肉食兽类随时可能吃到含原头蝴的牲畜内脏,终末宿主的感染和再感染不断重复。人类流动和贸易交往则是棘球蝴病(包虫病)流行扩散的原因之一。
    (6)防治知识缺乏:目前我国棘球蝴病高发流行区大部分是经济较为落后的中、西部少数民族地区。由于这些地区经济落后,交通不发达,农牧民的文化程度低,加上地域偏远棘球蝴病的防治宣传知识普及率不够,是造成棘球蝴病流行的原因之一。最近几年,我国其他非流行区也有陆续有关棘球蝴原发病人和动物感染的报道,这可能与近年兴起的宠物热有关,因狗、猫等宠物和人类亲密接触,对病原的传播起到关键作用。
    发病地区
    我国有由细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)的幼虫引起的囊型包虫病(cystic echinococcosis)和多房棘球绦虫(Echinococcusmultilocularis)的幼虫引起泡型包虫病(alveolar echinococcosis ) 。我国以囊型包虫病为主目前21个省(市、区)报道有原发性人、畜包虫病及家、牧犬细粒棘球绦虫感染。
    我国的流行地区区主要分布于西部、北部和西北的牧区和农牧区,其中以西藏、新疆、四川、甘肃、青海、宁夏、内蒙和云南等省(自治区)最为严重。由于流行地域广泛,宿主丰富,地理生态复杂,分布于我国的细粒棘球绦虫可能存在不同的株型。
    泡型包虫病又被称为“虫癌”,是高度致死的疾病,患者不经治疗,10年死亡率可达90% 。主要流行于我国的西藏、青海、四川、宁夏、甘肃、新疆的部分地区。
    我国是世界上包虫病高发的国家之一,重要的流行国家尚有东亚的蒙古,中亚地区的土耳其、叙利亚,伊拉克、土库曼斯坦、黎巴嫩,南美洲的阿根廷、智利、巴西,大洋洲的澳大利亚,以及非洲北部、东部和南部的一些国家。其他人体棘球蝴病(包虫病)的病原体还有少节棘球绦虫C E. oligarthrus)和伏氏棘球绦虫(E. vogeli ),目前我国没有这两种虫体。
    临床表现
    囊型包虫病潜伏期约1至30年,病程根据棘球蝴囊占位所在的器官不同而长短不一。包虫病早期可无任何临床症状,大多数病例是在体检和手术中发现的,部分病人是在死后进行尸检时发现的。包虫病的主要的临床表现为棘球蝴囊占位所在的器官(大部分为肝脏和肺脏)所致压迫、刺激或破裂引起的一系列临床症状。临床上根据棘球蝴所寄生的脏器,而命名为相应的包虫病。包虫病分为囊型和泡型两种。囊型全身多个脏器均可发生,其中以肝、肺多见。泡型包虫病原发病灶几乎都位于肝脏,患者前来就诊时多处于晚期。
    肝包虫病主要临床症状为包虫囊不断生长压迫牵拉肝脏和邻近的器官,主要引起患者肝区疼痛,坠胀不适,上腹饱满、食欲减退。其中巨大肝包虫囊肿可使横隔抬高,活动受限,严重者出现呼吸困难。肝包虫囊向下生长时,压迫胆总管可引起阻塞性黄疽。门脉高压,甚至出现腹水。
    肺包虫病的临床症状为感染早期一般无明显症状,囊肿长大压迫肺组织与支气管,患者可出现胸痛、咳嗽、血痰、气急,甚至呼吸困难。临床表现为阵发性呛咳,呼吸困难。可伴有过敏反应,甚至休克。若大血管破裂,可出现大咯血。
    肝泡型包虫病:主要临床症状为可出现胸部隐痛、胀痛或刺激性咳嗽,巨大囊型包虫病可引起压迫性肺不张,重者胸闷气促,甚至呼吸困难。合并感染时可出现肺脓肿症状,发烧、胸痛、咳嗽、咯脓痰,伴有支气管屡者,脓痰中带有囊碎屑,重者咯血。合并破裂者若穿入支气管,刺激支气管引起剧烈咳嗽,咯出大量水样囊液,其内带有内囊碎片,严重者能窒息死亡。其他部位包虫病:全身各个部位各脏器均可感染包虫病,以腹腔各器官感染多见(如:肾、脾等)。少数病人可同时存在2种棘球蝴混合感染。[2]
    一、包虫皮内试验 (卡松尼试验)简便而实用,阳性率约95%。试验方法以囊液抗原0.1-0.2毫升注射前臂皮内,15-20分钟后观察反应。阳性者局部呈红色丘疹,直径可达5厘米左右,并有伪足(即时反应)、2--2.5小时后消退;约12-24小时后继以皮肤红肿及硬结(延迟反应)持续1-3天。如病人血内有足量特异抗体,则抗原在皮内全被中和,不出现延迟反应。肝病及恶性肿瘤病人偶有假阳性反应。
    二、B超检查 可发现圆形之无回声区,并可测定其部位、大小与数目。
    三、同位素肝扫描 内有占位性病变。
    四、X线检查 右膈抬高。肝包虫囊退化后X线平片示弧形钙化影。
    本病之诊断可根据
    一、流行病史 患者有流行区居住史并有和狗密切接触史。
    二、临床表现 主要为右上腹无痛性、缓起的肿块。
    三、包虫皮内试验
    四、B超检查 可发现圆形之无回声区,并可测定其部位、大小与数目。
    五、同位素肝扫描 内有占位性病变。
    六、X线检查 右膈抬高。肝包虫囊退化后X线平片示弧形钙化影。
    流行区的病畜尸体应予深埋或焚毁,以免狗被感染。感染绦虫的狗应予捕杀或治疗,人应避免与狗密切接触,且应注意饮食卫生。
    如何治疗:
    包虫囊肿的治疗以外科手术摘除为主。对不宜手术摘除的弥漫性生长的多房性包虫病可用大剂量的甲苯咪唑试验治疗。其用量是每次400-600mg,一日三次,连服21-30天。报导甲苯咪唑成人口服量最大剂量有达3.0克/日,常规服药三个月。也有用丙硫咪唑0.8克/日,30日为一疗程,间隔两周可重复2--3个疗程。
    包虫病预防
    免疫预防
    免疫预防是防止包虫病流行比较理想的途径 。 采用现代分子生物学技术对细粒棘球绦虫的有效免疫原成分进行筛选和克隆 , 制备基因工程疫苗 , 为包虫病的免疫预防和免疫诊断开辟了新途径 。
    国外在控制包虫病流行方面取得了较理想的效果 。 将体外培养细粒棘球绦虫六钩蚴的排泄或分泌产物做成抗原 , 给绵羊接种后可使其获得抗细粒棘球绦虫卵的高度免疫力 , 证明六钩蚴能产生宿主保护性抗原 。 目前有研究者应用 E G 95 重组蛋白疫苗免疫细粒棘球蚴感染中间宿主 ( 羊 ) , 并取得较理想的结果 。 研究发现经 E G 95 重组蛋白疫苗免疫后 的中间宿主( 羊 ) , 可获得良好的免疫保护作用 ( 96 % ~ 98%), 从而能有效抵抗不同的细粒棘球蚴株 ( 新西兰株 、澳大利亚株和阿根廷株 )感染 , 降低包虫病的发病率。
 
【包虫试剂】犬粪包虫抗原检测试剂盒说明书
【包虫试剂】产品名称
通用名称:犬粪包虫抗原检测试剂盒
英文名称:Hydatid(Hyd)coproantigens Test Kit for Canine
【包虫试剂】包装规格 96份/盒、192份/盒
【包虫试剂】预期用途   本试剂盒采用夹心ELISA方法定性检测犬粪中包虫抗原。
【包虫试剂】检测原理 
如果待检样品中含有包虫抗原,就会与包被板上的包虫抗体及第二步加入的包虫抗体酶标结合物特异性结合,间接结合在包被板上的包虫抗体酶标结合物与底物反应的显色状况即可反映出样品中是否含有包虫抗原。
【包虫试剂】主要组成成份
序号
名称
规格(96T/192T)
序号
名称
规格(96T/192T)
1
包被板
96/192孔
7
终止液(6号液)
15mL×1瓶
2
酶结合物(1号液)
12/22mL×1瓶
8
阳性对照品
0.8mL×1支
3
洗涤液10×(2号液)
100mL×1瓶
9
阴性对照品
0.8mL×1支
4
底物(3号液)
15mL×1瓶
10
封板膜
3/6片
5
显色剂(4号液)
15mL×1瓶
11
说明书
1份
6
样品稀释液2×(5号液)
100mL×1瓶
 
 
 
【包虫试剂】储存条件及有效期   2~8℃避光保存,防止冷冻,有效期为12个月。
【包虫试剂】适用仪器   
含450nm和630nm波长的酶标仪;37℃恒温设备;可调单道/多道微量移液器。
【包虫试剂】样品要求
1.本试剂适用于检测犬粪样品;
2.应采集新鲜的犬粪样品进行测试。若不能及时检测,应将粪样低温冻存,防止腐败或反复冻融。如犬粪难以溶解,应适当捣碎处理。
【包虫试剂】检验方法
1.洗涤液配制:用蒸馏水或去离子水将洗涤液10×(2号液)按1:10稀释(例如,取100mL洗涤液10×,加900mL蒸馏水或去离子水混合),充分混匀即为工作浓度洗涤液。
2.样品稀释液配制:用蒸馏水或去离子水将样品稀释液2×(5号液)按1:1稀释(如取100mL浓缩样品稀释液加100mL蒸馏水或去离子水),充分混匀即为工作浓度样品稀释液。
3.样品处理:犬粪样品需要预先低温(-70℃以下)冷冻7天以上,以灭活虫卵。称取 1克犬粪,加入1mL样品稀释液,充分搅拌混匀,静置10分钟,再3000rpm离心10分钟,取上清液待检。
4.加样反应:样品孔,每孔仅加入100μL待检样品;空白对照2孔,每孔仅加入100μL样品稀释液;阴性对照2孔,每孔仅加入100μL阴性对照品;阳性对照2孔,每孔仅加入100μL阳性对照品。盖好封板膜,37℃避光反应30分钟。
5.洗板:甩去孔内液体,每孔注满工作浓度洗涤液洗板6次,每次均需静置1分钟;最后一次甩净,拍干。
6.加酶反应:除空白对照孔外,其余每孔加酶结合物(1号液)100μL,盖好封板膜,37℃避光反应30分钟。甩去孔内液体,如上洗板,拍干。
7.显色反应:按所需用量,临用前取等体积底物(3号液)和显色剂(4号液)充分混匀后每孔加100μL,盖好封板膜,37℃避光反应10分钟。
8.终止反应: 加终止液(6号液)50μL,以空白对照调零,用酶标仪于450nm波长(630nm作为参比波长)读取OD值。
【包虫试剂】参考值
1.Cut-off 值(COV)=阴性对照平均OD值×2.1(阴性对照孔OD值<0.15时按0.15计)。
2.有效性判定:
阴性对照孔OD值≤0.30(若大于0.30则实验无效);
阳性对照孔OD值≥0.50(若小于0.50则实验无效)。
【包虫试剂】检验结果的解释
样品OD值≥COV,判为包虫抗原阳性;
样品OD值<COV,判为包虫抗原阴性。
【包虫试剂】检验方法的局限性    本试剂盒仅供筛查,不作为确诊依据。
【包虫试剂】注意事项
1、试剂盒各组份从冷藏环境中取出时,必须平衡至室温后,方可开封启用。未使用完的试剂组份应及时放回2~8℃密封保存。
2、加试剂前应将试剂轻摇、混匀。
3、孵育时必须用封板膜密封板孔,封板膜不可以重复使用。
4、不同批次试剂盒的试剂组份或说明书不可混用。瓶盖每次使用后要盖紧,各瓶之间瓶盖不可混用。
5、弃用的试剂盒及样品都应按污染物妥善处理。试剂盒内终止液有腐蚀性,须小心使用。
 
 
提示:本文件内容及相关参数如有变更,恕不另行通知。我公司保留在不另行通知的情况下,对其中所包含内容进行更改的权利。具体操作须以产品内说明书为准。
 

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