检测试剂

口蹄疫试剂

 
    口蹄疫定义
    口蹄疫是世界上危害偶蹄动物的头号传染病,在过去十多年时间里,曾经取得了“攻坚克敌”辉煌业绩的传统口蹄疫疫苗在应用中弊端逐渐显现,急需更新换代。由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所于力研究员率领的课题组通过三年攻关,在国内率先研制成功了针对我国目前流行的血清型口蹄疫病毒样颗粒缺损腺病毒表达疫苗。16日,这种更加安全有效的第二代口蹄疫疫苗在哈尔滨通过了专家论证。这是记者从16日由黑龙江省科技厅组织召开的黑龙江省“十一五”重大科技攻关项目《动物疾病防治关键技术的研究与产业化开发-口蹄疫防治关键技术的研究与产业化》项目鉴定会上获悉的。
    口蹄疫是偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病,其病毒变异和流行传播速度都极快,可感染70多种家养和野生的偶蹄动物,在世界范围内对畜牧业及相关产业造成相当大的影响,世界动物卫生组织将其列为必须申报的传染病,我国将其列在一类动物传染病的首位。疫苗接种是成功预防、控制乃至最终消灭口蹄疫的最有效手段。传统的口蹄疫灭活疫苗虽然在控制我国口蹄疫疫情中发挥了重要作用,但其存在着免疫期短、有副作用以及活性病毒容易从工厂逃逸或因灭活不彻底而散毒的风险。
    于力课题组采用现代分子生物学技术,研制出安全、高效、可抵抗几个不同血清型病毒感染的新型口蹄疫疫苗,新疫苗克服了传统口蹄疫灭活疫苗的缺点:因其不含有口蹄疫病毒遗传物质,因此不具有感染性,安全性更高;不必加佐剂,副作用小;接种后可获得更持久的免疫反应和较长的免疫保护期;该疫苗的制备只是生产对人类和动物无毒无害的缺损腺病毒,不需要高度密闭性生产场所,消除了生产中的安全隐患,也降低了疫苗的生产成本;尤其重要的是,缺损腺病毒作为载体在体内不复制,再次接种时不干扰疫苗的免疫效果。
    症状
    该病潜伏期1—7天,平均2—4天病牛精神沉郁,闭口,流涎,开口时有吸吮声,体温可升高到40一41℃。发病1—2天后,病牛齿龈、舌面、唇内面可见到蚕豆到核桃大的水疱,涎液增多并呈白色泡沫状挂于嘴边。采食及反刍停止。水疱约经一昼夜破裂,形成溃疡,这时体温会逐渐降至正常。在口腔发生水疱的同时或稍后,趾间及蹄冠的柔软皮肤上也发生水疱,也会很快破溃,然后逐渐愈合。有时在乳头皮肤上也可见到水疱。本病一般呈良性经过,经一周左右即可自愈;若蹄部有病变则可延至2—3周或更久;死亡率1%--2%,该病型叫良性口蹄疫。有些病牛在水疱愈合过程中,病情突然恶化,全身衰弱、肌肉发抖,心跳加快、节律不齐,食欲废绝、反刍停止,行走摇摆、站立不稳,往往因心脏麻痹而突然死亡,这种病型叫恶性口蹄疫,死亡率高达25%~50%。犊牛发病时往往看不到特征性水疱,主要表现为出血性胃肠炎和心肌炎,死亡率极高。
    病理
    除口腔和蹄部病变外,还可见到食道和瘤胃粘膜有水疱和烂斑;胃肠有出血性炎症;肺呈浆液性浸润;心包内有大量混浊而粘稠的液体。恶性口蹄疫可在心肌切面上见到灰白色或淡黄色条纹与正常心肌相伴而行,如同虎皮状斑纹,俗称“虎斑心”。
    诊断
    口蹄疫病变典型易辨认,故结合临床病学调查不难作出初步诊断。其诊断要点为:
    ①发病急、流行快、传播广、发病率高,但死亡率低,且多呈良性经过;②大量流涎,呈引缕状;③口蹄疮定位明确(口腔粘膜、蹄部和乳头皮肤),病变特异(水泡、糜烂);④恶性口蹄疫时可见虎斑心;⑤为进一步确诊可采用动物接种试骏、血清学诊断及鉴别诊断等。
    口蹄疫与牛瘟的区别:牛瘟传染猛烈,死亡率高;瘤柘膜可见糜烂但蹄部无病变;胃肠炎严重;真胃及小肠粘膜有溃疡。
    口蹄疫与牛恶性卡他热区别:后者常散发;口腔及鼻粘膜有糜烂,但不形成水疱;常见角膜混浊。(A)肪治 口蹄疫宜采取综合性防治措施。平时要积极预防、加强捡疫,常发地区要定期注射口蹄疫疫苗。常用的疫苗有口蹄疫弱毒疫苗、口蹄疫亚单位苗和基因工程苗,牛在注射疫苗后14天产生免疫力,免疫力可维持4--6个月。一旦发病,则应及时报告疫情,同时在疫区严格实施封锁、隔离、消毒、紧急接种及治疗等综合措施;在紧急情况下,尚可应用口蹄疫高免血清或康复动物血清进行被动免疫,按每千克体重0.5--1毫升皮下注射,免疫期约2周。疫区封锁必须在最后1头病畜痊愈、死亡或急宰后14天,经全面大消毒才能解除。
    患良性口蹄疫之牛,一般经一周左右多能自愈。为缩短病程、防止继发感染,可对症治疗:①口腔病变可用清水、食盐水或O.1%高锰酸钾液清洗,后涂以1%一2%明矾溶液或碘甘油,也可涂撒中药冰珊散(冰片15克,硼砂150克,芒硝150克,共研为细末)于口腔病变处;②蹄部病变可先用3%来苏几清洗,后涂擦龙胆紫溶液、碘甘油、青霉素软膏等,用绷带包扎;③乳房病变可用肥皂水或2%一3~3硼酸水清洗,后涂以青霉素软膏。患恶性口蹄疫之牛,除采用上述局部措施外,可用强心剂(如安钠咖)和滋补剂(如葡萄糖盐水)等。
    检测
    1.蹄疫反转录聚合酶链反应(RT-PCR),用于检测疑似感染动物水疱皮或水疱液中所有血清型口蹄疫病毒,适用于口蹄疫病毒的检测、诊断和流行病学调查。
    原理:利用异硫氰酸胍方法提取RNA,在反转录酶的作用下,以RNA为模板,以引物为起点合成与RNA模板互补的cDNA链。利用西安天隆科技有限公司生产的DTC型基因扩增仪,在TaqDNA聚合酶的作用下,经高温变性、低温退火、中温延伸的循环,使特异性DNA片段的基因拷贝数放大一倍。经过35个循环,最终使基因放大数百万倍。将扩增产物进行电泳,经溴化乙锭染色后,在紫外灯照射下,肉眼可见DNA片段的扩增带。该方法可以检测所有亚型的口蹄疫病毒,检测结果为阳性,需进一步采用分型诊断试剂盒进行进一步检测。
    2.血清学试验 ,ELISA是目前检测FMDV感染较为常用的诊断方法,其与补结试验、中和试验及间接血凝抑制、免疫扩散沉淀试验相比较、具有灵敏、快速、价廉等优点。
    防治
    常规防治方法
    (1)预防病畜疑似口蹄疫时,应立即报告兽医机关,病畜就地封锁,所用器具及污染地面用2%苛性钠消毒。确认后,立即进行严格封锁、隔离、消毒及防治等一系列工作。发病畜群扑杀后要无害化处理,工作人员外出要全面消毒,病畜吃剩的草料或饮水,要烧毁或深埋,畜舍及附近,用2%苛性钠、二氯异氰豚酸钠(含有效氯≥20%)、1%~2%福尔马林喷洒消毒,以免散毒。接种。对疫区周围牛羊,选用与当地流行的口蹄疫毒型相同的疫苗,进行紧急接种,用量、注射方法、及注意事项须严格按疫苗说明书执行。
    (2)治疗病初,即口腔出现水泡前,用血清或耐过的病畜血液治疗。对病畜要加强饲养管理及护理工作,每天要用盐水、硼酸溶液等洗涤口腔及蹄部。要喂以软草、软料或麸皮粥等。口腔有溃疡时,用碘甘油合剂(1:1)每天涂搽3~4天,用大酱或10%食盐水也可。蹄部病变,可用消毒液洗净,涂甲紫溶液(紫药水)或碘甘油,并用绷带包裹,不可接触湿地。
    空间电场自动防疫方法
    对于设施以及牧场养殖动物的疫病,可利用空间电场生物效应进行实时预防。设置于环境安全型畜禽舍和牧场饲养空间的空间电场能够从三个方面满足动物疫病的实时预防。
    (1)空间电场电极系统电离空气产生微量的臭氧和硝酸气(二氧化氮),而臭氧可杀死空气中的微生物,硝酸气又对口蹄疫病毒具有专杀性,口蹄疫病毒耐火碱、生石灰但对pH值2~5的酸性物质抵抗力极弱,硝酸气可轻易使其失活。
    (2)空间电场可以实时降低空气病原菌浓度。空间电场实际上是与静电场相似,只是适用于防疫的空间电场发生设备的输出电压、电流设置在对人畜安全的范围内,因此,它具有静电场的空气净化能力,可以将畜禽舍内的空气微生物浓度至少降低原始的一半之多,进而降低传播风险。
    (3)空间电场可实时进行空气净化和臭气消解。偶蹄类动物生活环境中会有大量的粉尘或可吸入颗粒物以及氨气等恶臭气体,这些污染物会引起肺部感染、结膜发炎,进而继发多种疾病,而在空间电场却能够依据静电力去除空气颗粒物,并通过电离空气又能将恶臭气体分解为无害的小分子。
    空间电场自动防疫方法主要用于集约化畜牧养殖领域的环境安全建设,确保动物免遭突发性烈性疫病的传播,最大限度降低兽药的使用,确保养殖环境的生物安全。
    疫苗
    复旦大学生命科学院郑兆鑫教授和上海农科院徐泉兴研究员等科研人员经过10多年的协作攻关,在口蹄疫基因工程研究领域获得重大突破。经专家鉴定,他们研制成功的“抗猪O型口蹄疫基因工程疫苗”属国内首创,并填补了这一领域在国际上的空白。
    参加此项科研协作的研究单位有复旦大学生命科学院、上海农科院畜牧所、浙江农科院病毒所和中国农科院兰州兽医所。 经过长达18年的研究和试验,目前已完成抗O型口蹄疫病毒基因工程疫苗的基因克隆,并在大肠杆菌中合成抗原蛋白和100升发酵罐的中试生产,同时还完成田间实验和区域性实验等一系列动物免疫试验,取得了显著效果。该疫苗不是用灭活的病毒制成,不带任何感染性病毒,因此既不会引起感染,也无副作用,相当安全有效。家畜接受免疫后可对其保护4至5个月,疫苗在8摄氏度下可保存一年,已达到高质量的畜用疫苗标准。但要注意的是,疫苗注射后二十天后才发挥作用,建议在腊月中旬注射口蹄疫疫苗。
    解救
    不良反应及抢救
    1. 一般反应
    个别牛注射疫苗后精神萎靡不振、产奶量下降、食欲减退、体温稍升高。一般不需要特殊治疗,1~3天后恢复正常。
    2. 严重反应
    因个体差异,个别牛注射疫苗后会出现急性过敏反应,呼吸加快、可视黏膜充血、水肿、肌肉震颤、瘤胃臌气、口角出现白沫、倒地抽搐,因抢救不及时而死亡。
    治疗措施
    对最急性型反应:建议迅速皮下注射0.1%盐酸肾上腺素5毫克,视病情缓解程度,20分钟后可以重复注射相同剂量一次;肌肉注射盐酸异丙嗪(非那根)500毫克;肌肉注射地塞米松磷酸钠30毫克(孕畜不用)。对已休克牛,除应迅速注射上述药物外,还须迅速针刺耳尖、大脉穴(劲静脉沟前三分之一处的劲静脉上)放血少许、尾根穴(尾背侧正中,荐尾结合部棘突间凹陷处)、蹄头穴(蹄冠缘背侧正中,有毛与无毛交界处;即三、四蹄上缘,每蹄内外各1穴,共8穴)。迅速建立静脉通道,将去甲肾上腺素10毫克,加入10%葡萄糖注射液2000毫升静滴,如体温低于36.5℃的患牛除可用上述药物外,另加乙酰辅酶A1000单位、ATP(三磷酸腺苷)200毫克、肌苷3000毫克、25%葡萄糖2000毫升静滴。待牛苏醒,脉律恢复后,撤去此组药,换成5%葡萄糖盐水2000毫升,加入维生素C5克,维生素B63000毫克,静滴,然后再用5%硫酸氢钠液500毫升,静滴即可。
    急性型反应:一般只须迅速肌肉注射盐酸异丙嗪(非那根)500毫克、地塞米松磷酸钠30毫克(孕畜不用),皮下注射0.1%盐酸肾上腺素5毫克即可,病畜很快康复。
    疫苗不良反应的预防
    1. 在注射疫苗前仔细阅读说明书和认真调查健康状况,病畜瘦弱和临产母畜不注射,待机体恢复后补注。
    2. 曾有过疫苗反应病史的,建议在注射疫苗前,先皮下注射0.1%盐酸肾上腺素、盐酸异丙嗪药物,随即注射疫苗,以减少不良反应的发生。
    3. 以上药物剂量为成年牛用药剂量,育成牛酌情用药。
    问题
    1. 什么是“口蹄疫”?
    口蹄疫(foot and mouth disease,英文简称FMD),是一种由口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)感染偶蹄类动物(如猪、牛、羊、鹿等)所产生的疾病,其特征为受感染之偶蹄类动物的口、足等部位皮肤会出现水泡,而造成部份动物死亡,影响畜牧产业的发展甚钜,故普受各国的重视。[6]
    2. 哪些动物会罹患“口蹄疫”?
    “口蹄疫”病毒所感染的对象仅为偶蹄类动物,绝对不会感染其它家畜及鸡、鸭等家禽。
    3. 猪的“口蹄疫”会传染给人类吗?
    人类可能通过接触受感染动物而罹患口蹄疫,但这种情况很罕见。 因为口蹄疫病毒对胃酸敏感,所以人类通常不会通过食用肉类感染口蹄疫病毒。 在英国,最後一次确认人类罹患口蹄疫是在1967年。在欧洲大陆,非洲以及南美也只有很少感染案例。口蹄疫感染人类的症状包括不舒服,发烧,呕吐,口腔组织发生红色溃疡腐烂(表面腐蚀性水疱),偶有皮肤小水疱。对于人类,值得注意的是,该症状与另外一种病毒疾病的症状类似,那种疾病通常称为“手足口病”,更频繁地发生在人类身上,特别是小儿;那种疾病是由小核糖核酸病毒科的另一种病毒引起,它是一种称为柯萨奇A病毒的肠道病毒。因为口蹄疫很少传染人类但在动物间会以非常快的速度传染,所以它对农畜业的危害比对人类健康的危害要大的多。 位于世界各地的农民当口蹄疫疫情流行时可能一年的损失高达10亿美圆,其更将导致大量畜类被销毁以及来自牛奶与肉类产品收入的巨幅减少。
   4. 既然“口蹄疫”对人体无害,为什么仍要继续扑杀猪只?
    对发生”口蹄疫”的养猪场,须予全场扑杀原因,主要是”口蹄疫”病毒的扩散十分迅速,加上台湾地区至少70余年未发生口蹄疫,现有的在养猪只都无抵抗口蹄疫能力,在口蹄疫疫苗进口数量未能全面供应全部猪只注射使用前,为使其它尚未发生”口蹄疫”的养猪场免于受到感染而遭受重大的经济损失,必须扑杀发病猪场的全部猪只,以减少病毒散播而助于控制疫情。
    5. 世界上有哪些国家或地区是“口蹄疫疫区”?
    目前,世界上大多数的国家属于”口蹄疫疫区”,非口蹄疫的国家或地区仅占少数,如美国、加拿大、日本、韩国、澳洲、新西兰及一些欧洲国家等;东南亚各国、香港、中国等皆属”口蹄疫疫区”。事实上,美国、加拿大及丹麦过去都曾发生口蹄疫,经过努力肃清病毒之后,再恢复成为非疫区。
    6. 何谓“口蹄疫疫苗”?有何功用?
    将引起口蹄疫的病毒利用生物科技大量培养,收集后再予杀死等适当处理后,制成”口蹄疫疫苗”。”口蹄疫疫苗”注射健康的猪只数天后,就引起猪只体内产生蛋白质成分的免疫抗体,并于第一剂注射后三至四个礼拜再注射第二剂,以提高抗体之产生,此免疫抗体即可保护猪只不受口蹄疫病毒的感染。
    7. 已注射疫苗之猪只,其猪肉可以安心食用吗?
    “口蹄疫疫苗”是无毒的,打入猪只体内所产生的免疫抗体则是安全的蛋质成分,来自免疫猪只的猪肉经过加热烹调后,当然可以安心食用。
    8. 消费者如何辨识,方能买到健康安全的猪肉?
    口蹄疫病毒虽无碍于人体,但政府为让民众吃得安心、吃得愉快,除了在各地养猪场及肉品拍卖市场严格杜绝口蹄疫病猪流入市面外,更在各指定的合格屠场派驻兽医师逐一检查屠体。消费者若是喜好温体猪肉,可至传统零售肉摊购买,但应记得检视肉商是否备有合格屠宰场出货时随猪肉屠体所附,由驻场兽医师开具之”电宰卫生检查证明单”,以及猪皮上是否盖有合格的红色戳章;若喜欢低温猪肉则可至超级市场购买,除查看上述之“电宰卫生检查证明单”外,可在低温柜中挑选具C A S认证标志之冷藏或冷冻“CAS优良肉品”。
    9. 如果不慎吃到患有“口蹄疫”的猪肉时,有何影响?
    只要按前项要领选购猪肉,应无机会吃到患有口蹄疫的不合格猪肉。口蹄疫病毒不耐热,只要在摄氏85度加热1分钟的条件下,病毒即被杀死,故只要是充分加热烹食猪肉即无问题。口蹄疫病毒也不耐酸,人体的胃液酸度很高,万一有口蹄疫病毒入肚,也会立即被强酸杀死,实在无需担心口蹄疫问题。
 

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