检测试剂

猪蓝耳试剂

    【猪蓝耳试剂】猪蓝耳病曾称为“神秘猪病”、“新猪病”、“猪流行性流产和呼吸综合症”、“猪繁殖与呼吸综合症”、“蓝耳病”、“猪瘟疫”等,我国将其列为二类传染病 猪蓝耳病  接触传染性很高,它有地方流行性特性。猪蓝耳病毒只会感染猪,其它动物不会感染,各种日龄、品种的猪都可以感染此病毒,其中日龄在1月以内的仔猪和妊娠母猪是最易感猪群。
    发病机理
    PRRSV可通过血液循环穿过胎盘使胎猪受到感染,从而引起妊娠后期母猪流产等繁殖障碍。
    临诊症状
    猪蓝耳试剂】概述
    本病的潜伏期差异较大,引入感染后易感猪群发生PRRS的潜伏期,最短为3天,最长为37天。本病的临诊症状变化很大,且受病毒株、免疫状态及饲养管理因素和环境条件的影响。低毒株可引起猪群无临诊症状的流行,而强毒株能够引起严重的临诊疾病,临诊上可分为急性型、慢性型、亚临诊型等。
    猪蓝耳试剂】急性型
    发病母猪主要表现为精神沉郁、食欲减少或废绝、发热,出现不同程度的呼吸困难,妊娠后期(105~107天),母猪发生流产(图1-1)、早产、死胎(图1-2)、木乃伊胎(图1-3)、弱仔。母猪流产率可达50%~70%,死产率可达35%以上,木乃伊可达25%,部分新生仔猪表现呼吸困难,运动失调及轻瘫等症状,产后1周内死亡率明显增高(40%~80%)。少数母猪表现为产后无乳、胎衣停滞及阴道分泌物增多。
    1月龄仔猪表现出典型的呼吸道症状,呼吸困难,有时呈腹式呼吸,食欲减退或废绝,体温升高到40℃以上,腹泻。被毛粗乱,共济失调,渐进性消瘦,眼睑水肿。少部分仔猪可见耳部、体表皮肤发紫(图1-4 1-5),断奶前仔猪死亡率可达80%~100%,断奶后仔猪的增重降低,日增重可下降50%~75%,死亡率升高(10%~25%)。耐过猪生长缓慢,易继发其他疾病。
    生长猪和育肥猪表现出轻度的临诊症状,有不同程序的呼吸系统症状,少数病例可表现出咳嗽及双耳背面、边缘、腹部及尾部皮肤出现深紫色。感染猪易发生继发感染,并出现相应症状。
    种公猪的发病率较低,主要表现为一般性的临诊症状,但公猪的精液品质下降,精子出现畸形,精液可带毒。
    猪蓝耳试剂】慢性型
    这是在规模化猪场PRRS表现的主要形式。主要表现为猪群的生产性能下降,生长缓慢,母猪群的繁殖性能下降,猪群免疫功能下降,易继发感染其他细菌性和病毒性疾病。猪群的呼吸道疾病(如支原体感染、传染性胸膜肺炎、链球菌病、附红细胞体病)发病率上升。
    亚临诊型
    感染猪不发病,表现为PRRSV的持续性感染,猪群的血清学抗体阳性,阳性率一般在10%~88%。
    病理变化
    猪蓝耳试剂】大体病变
    无继发感染的病例除有淋巴结轻度或中度水肿外,肉眼变化不明显,呼吸道的病理变化为温和到严重的间质型肺炎,有时有卡他性肺炎,若有继发感染,则可出现相应的病理变化,如心包炎、胸膜炎、腹膜炎及脑膜炎等。
    病理组织学:PRRSV感染引起的繁殖障碍所产仔猪和胎儿很少有特征性病变,PRRS致死的胎儿病变是子宫内无菌性自溶的结果,没出现特异性;流产的胎儿血管周围出现以巨噬细胞和淋巴细胞浸润为特征的动脉炎、心肌炎和脑炎。脐带发生出血性扩张和坏死性动脉炎。
    生长猪较成年猪更常见特征性组织性病理变化,肺的组织学病变具有普遍性,有诊断意义。单纯的PRRS感染引起的肺炎以间质性肺炎伴随正常的呼吸道上皮为特征。其特点为肺泡间隔增厚,单核细胞浸润及Ⅱ型上皮细胞增生,肺泡腔内有坏死细胞碎片。
    PRRS和细菌、病毒混合感染时,病变应和并发感染的细菌/病毒的不同而有所变化,合并感染细菌性病原常引起复杂的PRRS肺炎,间质性肺炎常混合化脓性纤维素性支气管肺炎或被化脓性纤维素性支气管肺炎所掩盖。有些感染病例还可见胸膜炎。
    鼻甲部黏膜的病变是PRRS感染后期的特征,其上皮细胞纤毛脱落,上皮内空泡形成和黏膜下层淋巴细胞、巨噬细胞和浆细胞浸润。淋巴结、胸腺和脾脏的组织病理学变化,以发生肥大和增生、中心坏死、淋巴窦内有多核巨细胞浸润为特征,病早期可见脾脏白髓、扁桃体滤泡淋巴细胞坏死,后期脾核淋巴结细胞增生;另外PRRS感染引起的血管、神经系统、生殖系统的病变也主要表现为淋巴、巨噬细胞、浆细胞的增生和浸润。
    猪蓝耳试剂】鉴别诊断
    本病应与其它繁殖障碍和呼吸道疾病进行鉴别诊断,如应与伪狂犬病、猪圆环病毒病、猪细小病毒病、猪瘟、猪流行性乙型脑炎、猪呼吸道冠状病毒病、猪脑心肌炎、猪血凝性脊髓炎以及其他细菌性疾病进行区分。
    猪蓝耳试剂】防治
    1、坚持自繁自养的原则,建立稳定的种猪群,不轻易引种。如必须引种,首先要搞清所引猪场的疫情,此外,还应进行血清学检测,阴性猪方引入,坚决禁止引入阳性带毒猪。引入后必须建立适当的隔离区,做好监测工作,一般需隔离检疫4~5周,健康者方可混群饲养。
    2、规模化猪场要彻底实现全进全出,至少要做到产房和保育两个阶段的全进全出。
    3、建立健全规模化猪场的生物安全体系,定期对猪舍和环境进行消毒,保持猪舍、饲养管理用具及环境的清洁卫生,一方面可防止外面疫病的传人,另一方面通过严格的卫生消毒措施把猪场内的病原微生物的污染降低到最低限,可以最大限度地控制和降低PRRSV感染猪群的发生率和继发感染机会。
    4、做好猪群饲养管理。在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染猪场,应做好各阶段猪群的饲养管理,用好料,保证猪群的营养水平,以提高猪群对其他病原微生物的抵抗力,从而降低继发感染的发生率和由此造成的损失。
    5、做好其他疫病的免疫接种,控制好其他疫病,特别是猪瘟、猪伪狂犬和猪气喘病的控制。在猪繁殖一呼吸综合征病毒感染猪场,应尽最大努力把猪瘟控制好,否则会造成猪群的高死亡率;同时应竭力推行猪气喘病疫苗的免疫接种,以减轻猪肺炎支原体对肺脏的侵害,从而提高猪群肺脏对呼吸道病原体感染的抵抗力。
    6、定期对猪群中猪繁殖与呼吸综合征病毒的感染状况进行监测,以了解该病在猪场的活动状况。一般而言,每季度监测一次,对各个阶段的猪群进行采样进行抗体监测,如果4次监测抗体阳性率没有显著变化,则表明该病在猪场是稳定的,相反,如果在某一季度抗体阳性率有所升高,说明猪场在管理与卫生消毒方面存在问题。应加以改正。
    7、对发病猪场要严密封锁;对发病猪场周围的猪场也要采取一定的措施,避免疾病扩散,对流产的胎衣、死胎及死猪都做好无害处理,产房彻底消毒;隔离病猪,对症治疗,改善饲喂条件等。
    8、关于疫苗接种,总的来说如今尚无十分有效的免疫防制措施,如今国内外已推出商品化的PRRS弱毒疫苗和灭活苗,国内也有正式批准的灭活疫苗。然而,PRRS弱毒疫苗的返祖毒力增强的现象和安全性问题日益引起人们的担忧。国内外有使用弱毒疫苗而在猪群中引起多起PRRS的暴发,因此,应慎重使用活疫苗。虽然灭活疫苗的免疫效力有限或不确定,但从安全性角度来讲是没有问题的,因此在感染猪场,可以考虑给母猪接种灭活疫苗。
    猪蓝耳试剂】药物防治
    猪蓝耳病的预防措施:
    A.平时做好药物保健,保健方案中建议不要使用氯霉素类药物(氟苯尼考),慎用磺胺药物。药物治疗方面,要考虑应激、毒副作用、免疫抑制和诸多并发感染,预防猪蓝耳病注射疫苗进行预防。
    B.平时要经常消毒,消毒要使用多种类型的消毒药进行更换使用。(如卤素类、酸类、醛类、双季铵盐和双胍类、酚类和碱类消毒药)加强猪场消毒对预防猪蓝耳病是很好一种的方法。
    C.不要胡乱接种疫苗,猪场接种过多的疫苗,对猪群健康稳定是有绝对性的影响。(如:自家苗、PRRS弱毒苗、PR弱毒苗、猪瘟脾淋苗、还有进口的多联苗等)想依靠疫苗来预防猪高热病那是不可能的,最终是越打越乱,最后容易机体免疫失调。
    D.搭配合理的营养,增强机体的抗病能力。质量差的原料最好不要使用,避免导致慢性中毒,免疫力下降,诱发猪高热病。
    E.夏季注意降温通风,猪场卫生干净。要求对猪群冲水洗浴来防止热应激、中暑等可以诱发猪蓝耳病的环境因素。
    F.控制猪蓝耳病的稳妥高效办法:用复方花青素+牛磺酸+阿司匹林/拌饲料,临床治疗效果很好。
    猪场爆发猪猪蓝耳病的控制措施:
    饲料中添加药物拌料,用复方花青素+泰乐菌素+强力霉素(具体用量根据实际情况和技术人员指导说明)。
    猪蓝耳试剂】处方说明:
    1复方花青素纯中药复合提取物 产品中主要含花青素、绿原酸、黄酮、植物血凝素、皂甙等成分。本产品通过促进机体T细胞介导的免疫反应与NK细胞的活性,从而提高机体对病毒易感细胞的免疫功能。临床试验观察:有明显的调理猪群机体健康的功效,并且能控制病毒复制和病毒净化等作用。病毒净化效果奇佳。
    2.高热不退的病猪治疗:复方花青素+牛磺酸+阿司匹林/干净水中饮用,连续用3-5天。尽量不要给猪群注射针剂,防止应激导致心力衰竭。
    3.加强消毒:用含酸类消毒药(如过氧乙酸)每天进行消毒,坚持使用一段时间,后期改换其它类型消毒药消毒。
    4.猪群疫病稳定后。建议全群接种一次猪瘟疫苗,为避免接种应激,可以分次接种注射。(如接种5头份苗,先接种2头份,过3天在接种3头份)。
    5.猪群稳定后,要求做好药物保健,加强营养,经常消毒(每2-3天就一次),不要乱接种疫苗。
    猪蓝耳试剂】疫苗前景
    2007年4月,农业部颁布了《高致病性猪蓝耳病防治技术规范》,开始将高致病性猪蓝耳病纳入国家重大动物疫病政府强制性免疫范围。2009年我国生猪出栏数64,527.1万头,年底存栏数46,983.4万头,饲养量为111,510.5万头。根据《农业部关于印发<2010年国家动物疫病强制免疫计划>的通知》(农医发[2010]1号)及《农业部办公厅关于报送2010年重大动物疫病强制免疫疫苗经费申请报告的通知》(农办医[2010]4号),高致病性猪蓝耳病强制免疫方案按饲养量免疫2次,疫苗可以选择适用高致病性猪蓝耳病灭活疫苗或高致病性猪蓝耳病活疫苗。据此测算,我国高致病性猪蓝耳病疫苗的市场规模约为22.3亿头份,折合44.6亿毫升,市场空间巨大。
    针对高致病性猪蓝耳病的疫苗有灭活苗和活疫苗两种。2008年及以前,国内主要是采用灭活苗进行防疫,从2009年4月底,农业部开始批准了第一批共计4家企业生产高致病性蓝耳病活疫苗(JXA1-R株),活疫苗开始进入试点使用。两种疫苗各有优势,在免疫实践中,往往是针对不同的猪以及疫情情况使用不同的疫苗。根据农业部《2010年国家动物疫病强制免疫计划》,对商品猪和种母猪可选用灭活苗或活疫苗进行免疫,而种公猪选用灭活苗进行免疫。
    目前国内高致病性猪蓝耳病灭活苗的定点生产厂家有19 家,高致病性猪蓝耳病活疫苗的定点生产厂家有18家,其中本公司及中牧股份成都药械厂、普莱柯生物工程股份有限公司、广东永顺生物制药有限公司等是为数不多的几家同时获得了农业部指定高致病性猪蓝耳病灭活苗及活疫苗生产资质的厂家。
    疫苗进展
    基因编辑技术CRISPR/Cas9又立新功。曾成功克隆出多莉羊的英国爱丁堡大学罗斯林研究所近日发布公告称,该校科研团队再次取得“震惊世界”的科研突破:他们使用这一最新基因编辑工具,培育出一批能抵御致命性猪蓝耳病病毒感染的“超级猪”。这一技术一旦获得使用许可,全世界养猪产业将每年减少数十亿英镑损失。
 
【猪蓝耳试剂】猪蓝耳病抗原检测试剂盒说明书
【猪蓝耳试剂】产品名称
通用名称:猪蓝耳病抗原检测试剂盒(ELISA)
【猪蓝耳试剂】包装规格    96份/盒、192份/盒
【猪蓝耳试剂】预期用途    本试剂盒采用夹心ELISA方法定性检测猪组织或血清、血浆中的特异性猪蓝耳病抗原,可作为猪蓝耳病的筛查和辅助诊断。
【猪蓝耳试剂】检测原理
如果待检样品中含有猪蓝耳病抗原,就会与包被板上的猪蓝耳病抗体及第二步加入的猪蓝耳病抗体酶标结合物特异性结合。间接结合在包被板上的猪蓝耳病抗体酶标结合物与底物反应的显色状况即可反映出样品中是否含有猪蓝耳病抗原。
【猪蓝耳试剂】主要组成成份
序号
名称
规格(96/192T)
序号
名称
规格(96/192T)
1
包被板
96/192孔
7
终止液(6号液)
15mL
2
酶标结合物(1号液)
12/22mL
8
阳性对照品
1mL/2mL
3
洗涤液10×(2号液)
100mL
9
阴性对照品
1mL/2mL
4
底物液(3号液)
15mL
10
封板膜
3/6片
5
显色液(4号液)
15mL
11
说明书
1份
6
样品稀释液2×(5号液)
100mL
 
 
 
【猪蓝耳试剂】储存条件及有效期  2~8℃保存,防止冷冻,有效期为12个月。
【猪蓝耳试剂】适用仪器  含450nm和630nm波长酶标仪;37℃恒温设备;可调微量移液器。
【猪蓝耳试剂】试剂准备
1、洗涤液配制:用蒸馏水或去离子水将洗涤液10×(2号液)按1:10稀释(如取100ml浓液加900ml蒸馏水或去离子水),充分混匀即为工作洗涤液。
2、样品稀释液配制:用蒸馏水或去离子水将样品稀释液2×(5号液)按1:1稀释(如取100mL样品稀释液2×,加100mL蒸馏水或去离子水),充分混匀即为工作浓度样品稀释液。
【猪蓝耳试剂】
一、样本制备
样品采集:病死或扑杀的猪,取肺、扁桃体和脑等组织,肝脏除外;待检活猪,用注射器取血5 mL。立即检测或短期内2~8 ℃保存,如需长期保存,应置于-20℃以下。
二、样品处理
2.1 组织样品的处理:称取组织250mg,用剪刀剪成小块;将剪碎的组织置于适当的离心管中,加入1ml工作浓度样品稀释液,漩涡振荡1分钟,18-26℃条件下静置1-2小时;8000rpm离心5分钟,取50μl上清液按照说明书进行检测。
2.2 全血样品的处理:待血凝后取50µL血清按照说明书进行检测。
【猪蓝耳试剂】检验方法
1. 加样品稀释液:每孔加工作浓度的样品稀释液50μl。
2. 加样反应:每次试验设空白对照、阴性对照、阳性对照各2孔,分别加入样品稀释液、阴性对照、阳性对照各50μl;样品检测孔分别加组织或血清样品50μl。盖好封板膜,37℃避光反应1.5小时。甩去孔内液体,每孔注满(若用洗板机每孔加250μl)工作浓度洗涤液洗涤6次,每次均需停留1分钟;最后一次甩净,拍干。
3. 加酶反应:除空白对照孔外,其余每孔加酶标结合物(1号液)100μl,盖好封板膜,37℃避光反应30分钟。甩去孔内液体,如上洗涤3次,拍干。
4. 显色反应:按所需用量,临用前取等体积底物液(3号液)和显色液(4号液)充分混匀后每孔加100μl,盖好封板膜,37℃下避光反应15分钟。
5. 终止反应:加终止液(6号液)50μl,以空白对照调零,用酶标仪于450nm波长(630nm作为参比波长)读取OD值。
【猪蓝耳试剂】参考值
1、Cut-off 值 (COV)=阴性对照平均OD值×2.1 (阴性对照孔OD值<0.05时,按0.05计)。
2、有效性判定:
阴性对照孔OD值≤0.25(若大于0.25则实验无效);
阳性对照孔OD值≥0.50(若小于0.50则实验无效)。
【猪蓝耳试剂】检验结果的解释
样品OD值≥COV,判为猪蓝耳病抗原阳性;
样品OD值<COV,判为猪蓝耳病抗原阴性。
【猪蓝耳试剂】检验方法的局限性  本试剂盒仅供筛查,不作为确诊依据。
【猪蓝耳试剂】注意事项
1、试剂盒各组份从冷藏环境中取出时,必须平衡至室温后,方可开封启用。未使用完的试剂组份应及时放回2~8℃密封保存。
2、加试剂前应将试剂轻摇、混匀。
3、孵育时必须用封板膜密封板孔,封板膜不可以重复使用。
4、不同批次试剂盒的试剂组份或说明书不可混用。瓶盖每次使用后要盖紧,各瓶之间瓶盖不可混用。
5、用弃的试剂盒及样品都应按污染物妥善处理。试剂盒内终止液有腐蚀性,须小心使用。
 
 
提示:本文件内容及相关参数如有变更,恕不另行通知。我公司保留在不另行通知的情况下,对其中所包含内容进行更改的权利。具体操作须以产品内说明书为准。
 

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