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【猪蓝耳试剂】猪蓝耳病抗原检测试剂盒说明书

发布时间:2017-08-08 17:26:15 来源:猪蓝耳试剂 浏览次数:

 

猪蓝耳病抗原检测试剂盒说明书
【产品名称】
通用名称:猪蓝耳病抗原检测试剂盒(ELISA
【包装规格】96/盒、192/
【预期用途】本试剂盒采用夹心ELISA方法定性检测猪组织或血清、血浆中的特异性猪蓝耳病抗原,可作为猪蓝耳病的筛查和辅助诊断。
【检测原理】如果待检样品中含有猪蓝耳病抗原,就会与包被板上的猪蓝耳病抗体及第二步加入的猪蓝耳病抗体酶标结合物特异性结合。间接结合在包被板上的猪蓝耳病抗体酶标结合物与底物反应的显色状况即可反映出样品中是否含有猪蓝耳病抗原。
【主要组成成份】
序号
名称
规格(96/192T
序号
名称
规格(96/192T)(48T/96T)(48T/96T)(48T/96T)(48T/96T)(48T/96T
1
包被板
96/192
7
终止液(6号液)
15mL
2
酶标结合物(1号液)
12/22mL
8
阳性对照品
1mL/2mL
3
洗涤液10×2号液)
100mL
9
阴性对照品
1mL/2mL
4
底物液(3号液)
15mL
10
封板膜
3/6
5
显色液(4号液)
15mL
11
说明书
1
6
样品稀释液5号液)
100mL
 
 
 
【储存条件及有效期】 2~8℃保存,防止冷冻,有效期为12个月。
【适用仪器】 450nm630nm波长酶标仪;37℃恒温设备;可调微量移液器。
【试剂准备】
洗涤液配制:用蒸馏水或去离子水将洗涤液10×(2号液)按110稀释(如取100ml浓缩液加900ml蒸馏水或去离子水),充分混匀即为工作洗涤液。
样品稀释液配制:用蒸馏水或去离子水将样品稀释液5号液)按11稀释(如取100mL样品稀释液,加100mL蒸馏水或去离子水),充分混匀即为工作浓度样品稀释液。
【样本制备】
样品采集:病死或扑杀的猪,取肺、扁桃体和脑等组织,肝脏除外;待检活猪,用注射器取血5 mL。立即检测或短期内28 ℃保存,如需长期保存,应置于-20℃以下。
样品处理
2.1 组织样品的处理:称取组织250mg,用剪刀剪成小块;将剪碎的组织置于适当的离心管中,加入1ml工作浓度样品稀释液,漩涡振荡1分钟,18-26℃条件下静置1-2小时;8000rpm离心5分钟,取50μl上清液按照说明书进行检测。
2.2 全血样品的处理:待血凝后取50µL血清按照说明书进行检测。
【检验方法】
1. 加样品稀释液:每孔加工作浓度的样品稀释液50μl
2. 加样反应:每次试验设空白对照、阴性对照、阳性对照各2孔,分别加入样品稀释液、阴性对照、阳性对照各50μl;样品检测孔分别加组织或血清样品50μl。盖好封板膜,37℃避光反应1.5小时。甩去孔内液体,每孔注满(若用洗板机每孔加250μl)工作浓度洗涤液洗涤6次,每次均需停留1分钟;最后一次甩净,拍干。
加酶反应:除空白对照孔外,其余每孔加酶标结合物(1号液)100μl,盖好封板膜,37℃避光反应30分钟。甩去孔内液体,如上洗涤3次,拍干。
显色反应:按所需用量,临用前取等体积底物液(3号液)和显色液(4号液)充分混匀后每孔加100μl,盖好封板膜,37℃下避光反应15分钟。
终止反应:加终止液(6号液)50μl,以空白对照调零,用酶标仪于450nm波长(630nm作为参比波长)读取OD值。
【参考值】
Cut-off (COV)=阴性对照平均OD×2.1 (阴性对照孔OD值<0.05时,按0.05)
有效性判定:
阴性对照孔OD≤0.25(若大于0.25则实验无效);
阳性对照孔OD≥0.50(若小于0.50则实验无效)。
【检验结果的解释】
样品OD≥COV,判为猪蓝耳病抗原阳性;
样品OD值<COV,判为猪蓝耳病抗原阴性。
【检验方法的局限性】本试剂盒仅供筛查,不作为确诊依据。
【注意事项】
试剂盒各组份从冷藏环境中取出时,必须平衡至室温后,方可开封启用。未使用完的试剂组份应及时放回2~8℃密封保存。
加试剂前应将试剂轻摇、混匀。
孵育时必须用封板膜密封板孔,封板膜不可以重复使用。
不同批次试剂盒的试剂组份或说明书不可混用。瓶盖每次使用后要盖紧,各瓶之间瓶盖不可混用。
用弃的试剂盒及样品都应按污染物妥善处理。试剂盒内终止液有腐蚀性,须小心使用。
 
 
提示:本文件内容及相关参数如有变更,恕不另行通知。我公司保留在不另行通知的情况下,对其中所包含内容进行更改的权利。具体操作须以产品内说明书为准。
 

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